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    TC20細胞計數儀在實際應用中應該如何進行操作?

    時間:2019-06-10 瀏覽次數:647

      TC20細胞計數儀采用革新性的血細胞計數室設計,能使細胞呈單層、靜止、均一的狀態平鋪于檢測室中,確保了多個視野的光學聚焦的性,消除了信號重疊和漂移現象。此外,該技術還為那些檢測流動中的細胞某一單一視野、通過移動樣品來聚焦成像的儀器提供了解決方案。
     
      TC20細胞計數儀的原理:
      電阻抗檢測原理血細胞是相對不良導體,當血細胞懸浮電解質中,將小孔管插入細胞懸液,使其管內充滿稀釋液,當一個細胞通過小孔時,瞬間引起電壓變化出現一個脈沖信號,細胞體積越大,引起脈沖越大,產生脈沖振幅越高。
      流式細胞術加光學檢測原理利用流式細胞術使單個細胞隨著流體動力聚集的鞘流液在通過激光照射的檢測區時,使光束發生折射、衍射和散射,散射光光檢測器接受后產生脈沖,脈沖大小與被照細胞的大小成正比,脈沖的數量代表了被照細胞的數量。
     

      TC20細胞計數儀怎么操作:
      1、將計數板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計數板上。
      2、輕輕吹打細胞懸液,使細胞均勻分布;吸出少許細胞懸液滴在細胞入口,使細胞懸液充滿蓋玻片和計數板之間,靜置1-2min,使細胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細胞懸液進入旁邊的槽中。
      3、在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內的細胞進行計數,壓在大格四周邊線上的細胞只計數壓在2條邊線上的細胞(如右側和下方);若鏡下有2個細胞組成的細胞團,則應按單個細胞計算;若細胞團數量較多,占細胞總量的10%左右,則說明細胞分散不好會導致計算不準確,需要重新制備細胞懸液。
      4、按公式計數細胞數量:細胞數/mL=四個大格內細胞總數×104/4?(每一個大格的體積為長1mm×寬1mm×高0.1mm=0.1mm3,1mL=1000mm3,因此計算時需×104)。
     
      使用TC20細胞計數儀的注意事項:
      1、務必使分散成單個細胞,取樣計數前,充分混勻細胞懸液。
      2、顯微鏡下計數時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分。
      3、如果計數時細胞密度較大,數起來較麻煩也不容易計準,所以如果感覺細胞數量較多時,可以從細胞懸液中吸取10至100u1,用少量PBS稀釋后再作計數。
      4、注意蓋玻片下不要有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中。
      5、蓋玻片要盡量擦干凈,特別是不能帶有纖維,否則會造成體積不準。另外四個大格中平均每個大格的細胞數宜在50-150左右,這樣總數會比較準確。
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